雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)

　　在上面介紹的單波長(zhǎng)分光光度法測(cè)量中，是用兩個(gè)吸收池，其裝參比溶液，在選定的波長(zhǎng)下調(diào)其透光度為100%(即吸光度A=0)，然后再測(cè)量試樣溶液的吸光度。

　　當(dāng)試液中含有兩種吸收光譜互相重疊的成分時(shí)，用這種單波長(zhǎng)分光光度計(jì)單獨(dú)測(cè)量待測(cè)成分的吸光度就很困難，必須進(jìn)行萃取分離或加掩蔽劑等才能完成測(cè)定。另方面，由于必須使用兩個(gè)吸收池，吸收池的差異常會(huì)影響測(cè)量的精度，使測(cè)定更微量的成分受到了限制。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)則克服了上述缺點(diǎn)。

　　從光源發(fā)出的光分成兩束，分別經(jīng)過各自的單色器2、3后，得到波長(zhǎng)為λ1和λ2的兩束單色光。借切光器調(diào)制，這兩束光以定時(shí)間問隔交替照射裝有試樣溶液的吸收池。經(jīng)檢測(cè)器的光電轉(zhuǎn)換和電子控制系統(tǒng)的工作，在數(shù)字電壓表上顯示出λ1和λ2的透光差值△T，或是顯示兩者的吸光度差值△A。

　　根據(jù)朗伯-比爾定律，試樣溶液在兩個(gè)波長(zhǎng)λ1和λ2的吸光度的差值幽與溶液中待測(cè)物質(zhì)的濃度成比例。雙波長(zhǎng)分光光度法可將待測(cè)成分吸收光譜的任意波長(zhǎng)設(shè)為零點(diǎn)，測(cè)定它與任意其他波長(zhǎng)問的吸光度差值。

　　雙波長(zhǎng)分光光度法具有下列優(yōu)點(diǎn)：

　　(1)因?yàn)閮H用個(gè)樣品池進(jìn)行測(cè)量，不需要用參比吸收池，故可消除參比池與樣品池的不同而引起的誤差，使分析精度提高數(shù)倍;

　　(2)對(duì)混濁樣品進(jìn)行測(cè)定時(shí)，可消除不同混濁度所引起的背景吸收，即基線的變化幾乎*被消除;

　　(3)適當(dāng)選擇波長(zhǎng)，可掩蔽共存組分的干擾，因此可簡(jiǎn)化混合組分同時(shí)測(cè)定的手續(xù)及數(shù)據(jù)處理，并可提高靈敏度和準(zhǔn)確度;

　　(4)由于背景吸收及其他干擾的消除，可測(cè)定微小光度，能檢測(cè)出0.01～0.005的消光度值;

　　(5)可應(yīng)用于薄層色譜及紙上色譜的定量分析，測(cè)定時(shí)可消除薄層厚度不均勻所引起的誤差，使測(cè)量基線平穩(wěn)。

　　但由于雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)光路結(jié)構(gòu)和電學(xué)線路較為復(fù)雜，儀器價(jià)格比較昂貴，目前國(guó)內(nèi)雙波長(zhǎng)儀器并不普遍。應(yīng)當(dāng)指出采用單波長(zhǎng)分光光度計(jì)進(jìn)行雙波長(zhǎng)分光光度法的定量分析也是可行的，只是選擇的參比波長(zhǎng)λ1和測(cè)定波長(zhǎng)λ2要適當(dāng)。